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摘要:目的 明确自然环境下人类免疫缺陷病毒(HIV)的灭活规律,防止日常生活和医疗卫生工作中接触HIV阳性体液引起的HIV感染。方法 通过测TCID50,检测了HIV在水和含10%血清RPMI1640培养液稀释后,持续存在于4度、室温(20度~26度)、37度不同时间的感染活力,并对不病变样品盲目传三代以明确其感染性。结果<4度无论在水或细胞培养液中,HIV感染活力>35 d;室温及37度下,水中HIV感染活力可维持7 ~14d,培养液中可维持14~21 d。结论 HIV在自然环境中抵抗力较强,对HIV阳性体液及其污染物应谨慎处理,防止HIV意外传播。
HIV感染者(包括AIDS患者和潜伏期无症状感染者)的血液、精液、阴道分泌物、羊水、乳汁、唾液等体液均具有传染性,而HIV的污染在医院和患者家会经常发生。明确阳性体液中HIV在体外自然状态下的抵抗力,对减少不明原因的HIV感染、确保医务工作者及可能接触阳性体液人群的安全极为重要,也是AIDS预防工作中必须解决的问题。而文献对此报道不一。如第5版微生物学医学本科教材认为室温下HIV可保存活力达7 d(未明确在液体或干燥状态下)[1];而Resnick等[2]认为室温下HIV在液体中感染活力>15 d。本课题通过观察HIV至MT4细胞病变情况分别探索了4度、室温(约22度)、37度,在经细胞培养液及灭菌纯水10倍稀释后,不同时间的感染活力。
1 材料与方法
1.1 材料 病毒为HIV-1ⅢB亚型(SF6毒株,引自美国),毒力为6.5 TCID50;细胞为MT4细胞,系携HTLV基因的传代人T淋巴细胞(引自日本),
细胞培养液为补加10%热灭活新生牛血清的RPMI1640培养基(美国Gibco公司),含100 U/ml青霉素,100Lg/ml链霉素和5mmol/ml Hepes。
1.2 方法
1.2.1 试验分组 细胞培养液及灭菌纯水与HIV毒种以9B1的比例配制,混匀后各自均分3管(分管前取样测0时感染力),分别放置于4度冰箱、室温、37度温箱,并分别于3、7、14、21、28d及35d取样测病毒对MT4细胞的感染活力。
1.2.2 HIV感染活力的测定 用长势良好的MT4细胞0.1 ml/孔接种96孔细胞培养板;用常规培养液10倍系列稀释1.2.1所取各样品,0.1 ml/
孔加入上述96孔细胞培养板,每个稀释度做4复孔。37度、5% CO2孵箱培养。于滴定后第3天末补培养液50ul/孔,逐日观察记录细胞病变状况至第7天;Reed-Ch法计算各样品TCID50,不足1个log按<1计。对不产生细胞病变样品,盲传三代观察有无病变。盲目传代方法:从不病变样品的细胞培养板最高稀释度起取3个稀释度,各孔分别混匀后取出0.1 ml,按顺序对应加入新准备的含MT4细胞的96孔细胞培养板继续培养观察有无病变。如此,连传三代,未出现任何病变为阴性,计做/-0;否则,任何一代的任何一孔出现病变即为盲目传代阳性,计做/-(+)0。
2 结 果
  各样品TCID50及盲传代测定结果见表1。以0.9代表TCID50值<1、以0.4代表无病变样品盲传三代中传出病变、以0代表无病变,用SPSS软件交互式做图法图示上述不同样品感染活力测定结果,见图1和图2。结果显示1)无论在培养液或纯水中,室温和37度下HIV感染活力下降较快,而4度下感染活力经快速下降后在低水平(TCID50在2.00~2.50)维持很长时间(>35 d)。(2)在室温和37度下,HIV在细胞培养液中抵抗力强于其在不含血清等有机物的纯水中,前者感染活力可维持14~21 d,后者可维持7~14 d。
表1 不同样品感染活力测定结果
项 目    温度(c)     时间(d)
                            0    3    7   14    21    28    35
培养液    4            6.33 NT 3.33 3.00 3.00 2.00 2.00
培养液   室温      6.30 NT <1.00 -(+) - - -
培养液    37          6.30 NT <1.00 -(+) - - -
纯水      4            4.77 3.67 3.50 3.50 3.00 2.50 2.50
纯水     室温      4.70 1.77 -(+) - - - -
纯水      37          4.70<1.00 -(+) - - - -
  注:表中数字为TCID50值;NT代表未测;-代表无病变; -(+)代表无病变样品盲传三代中传出病变。
3 讨 论
  由结果显示室温和37度下,HIV在含血清等有机物的液体中感染活力可持续较长时间(14~21 d);在水溶液中可持续7~14 d。而在4度下无论有无有机物存在,感染活力均>35 d。Mcdougal等[3,4]已证明热灭活HIV(56度)不受基质(血清、培养基等)影响,结合本研究结果可以认为HIV抵抗力在一定温度范围内(室温和37度下)与基质有关,但在较低(4度)和较高温度下与基质无关。
Barre-Sinoussi等[5]报道室温下HIV悬液感染活力>10 d。而Resnick等[2]用保存在含50%人血浆中的HIV感染已被植物血凝素刺激的人外周血T细胞,研究认为液体状态HIV在室温下感染活力可持续>15 d、37度下可持续11~15 d。本研究结果与Resnick等报道的较为一致。但本研究所用HIV稀释液(培养液和水)更接近与最常见的自然状态下阳性体液污染环境的方式~稀释;本研究用MT4细胞作为HIV感染的靶细胞,比用已被植物血凝素刺激的人外周血T细胞病变易观察,结果更为敏感;此外本研究直接采用虽然烦琐但更准确可靠的观察细胞病变、对不病变样品盲目传三代继续观察病变的方法检测HIV感染活力,放弃不能准确反应病毒感染活力的测逆转录酶(RT)活性方法(因稀释等处理使RT很快下降到测不出,所以测RT不能准确判断病毒感染活力,而直接观测病毒感染活力更为有效[2,6])。总之,HIV在自然环境中有较强的抵抗力,即便用水稀释HIV病毒液10倍,室温下其感染活力仍达7~14 d、4度可>35 d。虽然HIV对乙醇等多种消毒剂敏感,但医务工作者对未明确定性的受检标本及患者排泄物,对生活中的可疑体液及其污染的桌面、台面、地面等,均应彻底消毒并清洁处理以防止HIV意外传播。
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发表于 2014-3-22 12:13
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