多种方法对早期HIV 核酸阳性者系列血清的跟踪检测

caiqq

多种方法对早期HIV 核酸阳性者系列血清的跟踪检测
李德钧1，刘大鹏1，孙茂利1，臧亮2，马宁3，赵志杰1，王东2
( 1． **省大连市疾病预防控制中心，**大连116021; 2． **省大连市血液中心，**大连116027;
3． **省疾病预防控制中心，沈阳110005)
［摘要］ 目的: 比较不同方法对早期HIV 感染者血清检测的“窗口期”及其敏感性，为早期诊断和预防提供
依据。方法: 用多种方法对HIV 核酸检测阳性的早期感染者进行追踪检测，观察抗原抗体、病毒载量的动态
变化及早期临床症状。结果: 梅里埃4 代ELISA 检测的“窗口期”为三周。国产4 代、3 代ELISA 及快检试剂
的“窗口期”为四周。首次报告早期感染者血清存在HIV 抗体下降的“波谷期”。相应症状出现于暴露23 d
时; gp160 条带检出于暴露30 d; 病毒载量于暴露80 d 时达高峰。结论: 在HIV 感染早期，要选择敏感性高的
检测试剂，以防漏检。
［关键词］ HIV 早期感染; 抗原抗体检测; “窗口期”
［中图分类号］ R512． 91 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1004 － 8685( 2012) 12 － 2880 － 03

艾滋病是由人类免疫缺陷病毒( HIV) 引起的至今
仍在全球肆虐的重大传染病。艾滋病的早期诊断在艾
滋病的治疗和预防，尤其是在防止血源HIV 传播上有重
要的现实意义。目前，P24 抗原检测、抗原抗体联合试验
( 第4 代ELISA) 和核酸检测已用于临床的早期辅助诊
断、献血员筛查和流行病学研究［1 ～ 4］。本文对在无偿献
血人群中发现的一例早期HIV RNA 阳性者，用多种方法
进行了系列血样跟踪检测，比较了不同方法的敏感性和
检测“窗口期”，分析了HIV 早期感染者血样中抗原抗体
及病毒载量的动态变化并描述了HIV 感染者早期出现
的临床症状。
1 材料与方法
1． 1 血清来源
从2011 年9 月28 日－ 2012 年2 月19 日，共采静脉
血16 次，间隔天数见表1。前2 次血浆由市血液中心送
检，第13 次由市六院采集，其余13 次由本室采集，每次
采集EDTA 抗凝血6 ml，3000 rpm 离心15 min 后，吸取
血浆层于－ 70℃保存。
1． 2 检测方法和试剂
1． 2． 1 抗原抗体检测
1． 2． 1． 1 HIV第4 代ELISA: 上海梅里埃公司生产，批号
A55GA; 北京万泰，批号H20110303。
2880 中国卫生检验杂志2012 年12 月第22 卷第12 期Chinese Journal of Health Laboratory Technology，Dec 2012; Vol 22 No 12
1． 2． 1． 2 HIV第3 代ELISA: 北京万泰，批号I20110305;
丽珠3 代ELISA，批号2011050002。
1． 2． 1． 3 HIV抗体快速检测: 胶体硒法: Inverness Medical
Japan Co． Ltd． 批号13575K100; 胶体金法: 韩国SD
生产，批号023410; PA( 明胶颗粒凝集) : 日本伯乐富士
瑞必欧株式会社生产，批号MZ10802。
1． 2． 1． 4 HIV 抗体确认实验: WB( 蛋白印迹) : Diagnostic
HIV Blot 2． 2 试剂，新加坡Genelabs 公司生产，批号
AE1013。
1． 2． 2 病毒载量检测HIMCAP48，批号: P1143100000。
所有实验均严格按说明书操作，试剂均在有效期内
使用。
2 结果
2． 1 流行病学调查
患者，男， 39 岁，汉族，已婚，大连市人，2
011 年9 月
28 日献血筛查血浆HIV RNA 呈阳性。最近一次性行为
发生在9 月11 日，是唯一一次肛交行为，为被动，未使用
安全套。该患者自2003 年第一次献血至被查出HIV
RNA 阳性，共献血29 次，其中2011 年共献9 次，每次献
血小板一个治疗量( 相当于400 cc 血量) 。上一次献血
日期是8 月28 日，RNA 检测为阴性。10 月4 日曾出现
头痛、发热、疲倦、口腔溃疡和皮疹等早期感染症状，一
周后症状消失。12 月17 日CD4 细胞检测为
550 个/mm3。其妻子于10 月23 日检测HIV 抗体为阴
性。
此次接触的性伴为在校大三学生，男，21 岁，汉族，
大连市人，1
0 月16 日经WB 确诊为HIV － 1 抗体阳性，
血清带型为gp160、gp120、p66、p55、p51、gp41、p31、p24。
2． 2 不同方法跟踪检测结果
结果见表1。在检测血浆RNA 阳性当天，即暴露后
17 d 时，2
种4 代ELISA 和2 种3 代ELISA 均为阴性，梅
里埃4 代ELISA S /CO 略高于其他ELISA 方法。24 d
时，梅里埃4 代ELISA 出现较强反应，万泰4 代ELISA
接近于阳性。30 d 时，万泰4 代ELISA、万泰3 代ELISA
和丽珠3 代ELISA 也出现较强反应，万泰4 代ELISA 的
S /CO 值高于万泰3 代ELISA 和丽珠3 代ELISA。梅里
埃4 代ELISA 检测的“窗口期”至少要大于17 d，估算为
三周。万泰4 代ELISA、万泰3 代ELISA 和丽珠3 代
ELISA 检测的“窗口期”至少要大于24 d，估算为四周。
梅里埃4 代ELISA 在感染早期敏感性最高，其次是万泰
4 代ELISA，再次是万泰3 代ELISA 和丽珠3 代ELISA。
如图1 所示，4
代ELISA 和3 代ELISA 均出现S /CO 值升
高、下降再升高的趋势。
表1 不同方法对HIV 早期感染者系列血样跟踪检测结果
暴露后时间
( t /d)
               4 代ELISAa            3 代ELISAa         金标   硒标     PA                    WB                             病毒载量
                梅里埃    万泰           万泰     丽珠                                           gag   pol   env
17              0.42     0.07         0．12   0．07     –       –       –                  –     –     –                  11746
24             7．16    0．86         0.08    0．07    –       –       –                  –      –     –                    Nd
30             10．33   13．28      9.31     9．67    +       +        +                  –       –    160                   Nd
35              5．31    7．17       8．28    5．11    +       +        +              24b       –      160                  Nd
42              6．01    5．51       5．11     3．62   +       +         +               2 4      –      160                  Nd
49              9．18    5．98        4．50    4．03   +       +         +               24       –      120b 160           Nd
52            14．70    12．16      10．88   9．97   +       +         +               24     66b     120，160          Nd
59 17． 50 16． 44 14． 06 11． 59 + + + 24 66 120，160 62585
66 17． 90 17． 26 16． 01 12． 49 + + + 17，2
4 66 120，160 89408
73 19． 00 16． 93 14． 05 12． 10 + + + 17，2
4 51，66 120，160 88304
80 19． 88 20． 11 17． 35 13． 25 + + + 17，2
4 51，66 41，1
20，1
60 128101
86 19． 81 21． 10 19． 64 13． 08 + + + 17，2
4 51，66 41，1
20，1
60 91092
93 19． 94 22． 23 19． 11 14． 18 + + + 17，2
4 31b，51，6
41，1
20，1
60 Nd
118 21． 96 Nd Nd Nd Nd Nd Nd 17，2
4 31，5
1，6
6 41，1
20，1
60 Nd
136 22． 15 Nd Nd Nd Nd Nd Nd 17，2
4 31，5
1，6
6 41，1
20，1
60 87095
167 19． 60 Nd Nd Nd Nd Nd Nd 17，2
4 31，5
1，6
6 41，1
20，1
60 71504
注: a ELISA 结果为S /CO 值，S /CO 值≥1 为阳性反应; b为浅色带; + 为阳性反应; –为阴性反应; Nd: not done．
金标、硒标和PA 三种快速检测试剂敏感性相同，窗
口期至少大于24 d，30 d 时均为阳性。WB 在暴露后
30 d时出现gp160 条带，3
5 d 时出现p24 条带， 52 d 时出
现p66 条带，93 d 时出现p31 条带，167 d 时仍没出现
P55 条带。
暴露17 d 时，病毒载量为11746 cp /ml，80 d 时达高
峰为128101 cp /ml，86 d 时开始下降，167 d 时为
71504 cp /ml。
3 讨论
该病例是大连市首次检测核酸发现的HIV 早期感
染者，通过流行病学调查和跟踪检测，明确了传染原、传
染途径和传染日期，分析了早期感染者外周血抗原抗体
及病毒载量的动态变化和临床症状，同时，还评估了多
种检测方法的敏感性和“窗口期”。为艾滋病的早期诊
断提供了临床和实验室依据。
据报道，4
0% ～ 90%的HIV 感染者在暴露后的2 周
～ 4 周，可出现发热、疲倦、淋巴腺肿大、肌痛、恶心、皮
中国卫生检验杂志2012 年12 月第22 卷第12 期Chinese Journal of Health Laboratory Technology，Dec 2012; Vol 22 No 12 2881
图1 4 代ELISA 和3 代ELISA 检测不同时间
血清S/CO 曲线
疹、腹泻等症状［5 ～ 7］。其中，发热和皮疹是诊断早期感染
的最特异的临床症状［8］。本文调查该感染者在暴露23 d
时出现了发热、皮疹、口腔溃疡等症状，符合早期感染的
临床特点。
“窗口期”是指人体感染病毒后到外周血液中能检
测出病毒标志物的最短时间。不同的检测方法由于检
测标志物不同而“窗口期”不同，而相同的方法由于机体
免疫功能差异或感染毒株毒力差异等因素“窗口期”也
不尽相同。有报道4 代ELISA 的“窗口期”可缩短到暴
露后的第二周［9］，也有报道3 代ELISA 的“窗口期”多达
7 个月以上［10］。我们用梅里埃4 代ELISA 检测的“窗口
期”是在第3 周，而万泰4 代ELISA 的“窗口期”大于第3
周。万泰3 代ELISA、丽珠3 代ELISA 和硒标、金标、PA
等快速法相同，“窗口期”在第4 周。梅里埃4 代ELISA
比3 代ELISA 缩短了一周。
有文献报道，由于第4 代ELISA 检测抗原的敏感性
相对较低且约1 /3 检测抗体的能力不能利用，因此在
P24 抗原下降和抗体阳转之前会产生暂短的第2 窗口
期［9， 11，12］。本文通过连续跟踪检测没有发现第2 窗口
期。分析这可能与感染者机体免疫系统对抗原的免疫
应答能力较强有关，也就是当血液中P24 抗原还没完全
下降， IgM 抗体就已经产生。本文所用的两种4 代
ELISA 检测抗体的敏感性与第3 代ELISA 相当。
从图1 S /CO 的动态曲线来看，4 代ELISA 与3 代
ELISA 在感染的早期过程均出现S /CO 值升高、下降再
升高的一个反应过程。与以往报道不同［13 ～ 15］，我们首次
发现机体抗体曲线不是逐渐上升，而是存在一个抗体下
降的“波谷期”。按使用试剂的原理和抗原抗体产生的
一般规律来分析，3
代ELISA 检测出现的第一个高峰是
特异性IgM 抗体，而4 代ELISA 检测出现的第一个高峰
是P24 抗原和特异性IgM 抗体，之后逐渐升高的是特异
性IgG 抗体。“波谷期”是IgM 抗体下降的结果。因本
次在“波谷期”检测的S /CO 最低值是3． 62，所以应选择
敏感性高的试剂，以防在HIV 抗体检测中出现第2 窗口
期而漏检。
要提高4 代ELISA 检测抗原的敏感性，关键要选好
包被的抗体种类。现在使用的4 代ELISA 检测抗原包
被的是P24 抗体。而我们与李林报道一致［15］，用WB 最
先检出的是gp160 抗体，而后检出的是p24 抗体。提示
如果4 代ELISA 同时包被p24 抗体和gp160 抗体，将大
大提高第4 代ELISA 检测抗原的敏感性。
Hethc 等人提出用p31 条带识别HIV 早期感染的方
法，认为早期感染者在WB 不确定后到p31 条带阳转时
间平均是52 d［16］。也有人认为主要条带( p24，gp41，
gp120 /gp160) 与p31 条带出现的间隔时间是35 d( 范围
在23 d 至47 d) ［10，17］。在暴露后93 d，我们检测到了较
弱的p31 条带，从不确定结果( gp160) 至p31 条带出现
为63 d，从主要带( p24，gp120 /gp160) 至p31 条带出现
为44 d。结果表明p31 条带的缺失和出现可作为识别
HIV 早期感染的一个指标。

benson_2013

能不能查到原始文章在期刊刊登时参考文献的目录？编号必须是从1到17（或以上）的。如果能请帮忙贴一个出来，多谢！

ilyxyn

本人就是大连的 六周检测为阴  目前大连都是三代 但医生表示三代就是四周 这个是有过研究报告的。原来报告在这，今天看到了 不管怎么滴六周我肯定脱了!

benson_2013

ilyxyn 发表于 2013-5-16 14:05
本人就是大连的 六周检测为阴  目前大连都是三代 但医生表示三代就是四周 这个是有过研究报告的。原来报告 ...

单病例研究的结论是否有统计学意义是有争议的，三代4周还是有点短，毕竟IgM的抗原结合能力并不强，有时可能会出现漏检。6周基本都是IgG了，检测排除应该是很保险的。

caiqq

中国卫生检验杂志2012 年12 月第22 卷第12 期

benson_2013

caiqq 发表于 2013-5-16 14:53
中国卫生检验杂志2012 年12 月第22 卷第12 期

这个查到了，但网上并没有完整电子版，参考文献的排序也不对，这份期刊要查到原件也不太容易。

caiqq

benson_2013 发表于 2013-5-16 14:55
这个查到了，但网上并没有完整电子版，参考文献的排序也不对，这份期刊要查到原件也不太容易。

我有PDF，CAJ两种格式的文章。

benson_2013

麻烦看看参考文献部分的排列是不是从1到17，因为文章内容有相关提及，如果是的话麻烦发给我一份，多谢！
我对一部分参考文献比较感兴趣。

caiqq

benson_2013 发表于 2013-5-16 15:03
麻烦看看参考文献部分的排列是不是从1到17，因为文章内容有相关提及，如果是的话麻烦发给我一份，多谢！
...

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benson_2013

非常感谢！