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1、认识HIV病毒
人类免疫缺陷病毒直径约120纳米，大致呈球形。病毒外膜是磷脂双分子层，来自宿主细胞，并嵌有病毒的蛋白gp120与gp41；gp41是跨膜蛋白，gp120位于表面，并与gp41通过非共价作用结合。向内是由蛋白p17形成的球形基质（Matrix），以及蛋白p24形成的半锥形衣壳（Capsid），衣壳在电镜下呈高电子密度。衣壳内含有病毒的RNA基因组、酶（逆转录酶、整合酶、蛋白酶）以及其他来自宿主细胞的成分（如tRNAlys3，作为逆转录的引物）。北京协和医院感染内科李太生
2、病毒在外界的生存能力
HIV对热敏感。56℃30分失去活性，但在室温保存7天，仍保持活性。不加稳定剂病毒-70℃冰冻失去活性，而35%山梨醇或50%胎牛血清中-70℃冰冻3个月仍保持活性。对消毒剂和去污剂亦敏感，0.2%次氯酸钠0.1%漂白粉，70%乙醇，35%异丙醇、50%**、0.3%H2O20.5%来苏尔处理5′能灭活病毒，1%NP-40和0.5%triton-X-100能灭活病毒而保留抗原性。对紫外线、γ射线有较强抵抗力。
3、HIV传染源
HIV感染者是传染源，曾从血液、精液、阴道分泌液、眼泪、乳汁等分离得HIV
HIV的感染是一个机率，必须同时具备三个完整的条件，一，存活的病毒；二，足够的量；三，进入人体细胞组织。
病毒到底能够存活多久呢？这个在第2点中就已经谈到了，足够的量，多少量是足够的量？一滴针尖大的新鲜血液就可以构成感染，HIV病毒的大小在第1点中就谈到了，这就是在职业暴露中被针刺为什么是件很危险的事的原因，如果很不幸的话，纹身，手指长有倒刺插入阴道，甚至试带隐形眼镜都可以构成感染。进入人体细胞组织，这个通常就跟接触时间的长短、有无皮肤破损有关系了。HIV是很容易感染的，也是不容易感染的，因为同时符合三个条件的可能性很低，但是只要同时符合了这三个条件，却又是很容易感染的。
4、窗口期到底有多少时间
1、从受到艾滋病病毒感染, 到体内产生出艾滋病病毒抗体，这一段时间称为窗口期。在窗口期内，艾滋病病毒感染者的血液检测查不到艾滋病病毒抗体，结果呈阴性。窗口期的长短个体有差异, 一般2周到3个月，我国目前各疾病控制中心普遍认可的窗口期是3个月。在窗口期虽测不到HIV抗体，但体内已有HIV，因此窗口期同样具有传染性。《性传播疾病的临床管理》（中国与欧盟性病艾滋病防治培训项目中方和欧方共同编写的教材）108页对“窗口期”的定义“一般HIV感染后，平均血清阳转时间为65天，95%感染者在6个月内阳转。”
5、超长窗口期是怎么回事？
已知HIV血清转换期可达18～42个月，个别可达63个月，此期HIV感染，病毒可持续潜伏或宿主产生免疫耐受。感染HIV，但血清抗体阴性，这可能是HIV感染量少、病毒潜伏或整合在一些敏感细胞内如外周的单个核细胞内，暂时不被激活，而逃逸了机体免疫**。也可能是感染者年轻，机体免疫功能好而抑制了病毒表达。其次，其它HIV病毒亚型的感染或同时感染其他病毒，使其持续处于窗口静止期。
6、HIV是如何检测的
一、 诊断依据：
（一） 流行病学及临床表现
（二） 实验室检查
（1） 主要是中度以上细胞免疫缺陷包括：CD4+T 淋巴细胞耗竭：T淋巴细胞功能下降，外周血淋巴细胞显著减少，CD4<200/μl，CD4/CD8<1.0，（正常人为1.25～2.1），迟发型变态反应皮试阴性，有丝分裂原刺激反应低下。
（2） B淋巴细胞功能失调：多克隆性高球蛋白血症，循环免疫复合物形成和自身抗体形成。
（3） NK细胞活性下降
（4）各种致病sex染的病原体检查如PCR。组织学证实的恶性肿瘤，如KS；
（三）HIV抗体检测
1.酶联免疫吸附法（ELISA）；
2.明胶颗粒凝集试验（PA）；
3.免疫荧光检测法（IFA）；
4.免疫印迹检测法（Western Blot，简称WB法）；
5.放射免疫沉淀法（RIP）。
其中前三项常用于筛选试验，后二者用于确证试验。HIV感染后数周或数日内常不能检出抗体，95%的受染者在5个月内可测出抗体。但也有感染后3-4年仍不能检出抗体者，此时有必要检测HIV病毒。
（四）PCR技术检测HIV病毒
二、PCR技术在HIV检测中的应用
PCR可用来追踪HIV的自然感染史。可在其它血清学和病毒学标志出现前检测病毒序列，这样可判定无症状而且血清阴性患者潜在的HIV的传播性；可用来监测长潜伏期（4～7年）病人，以及在抗病毒治疗期间病毒的水平；也可用于HIV-1血清阳性母亲的婴儿的HIV检测。在婴儿出生后最初的6～9个月期间，他们的血液中存在母体的抗体，因此用PCR可判定婴儿是否真正被HIV感染。
（一）血清抗体阳性病人HIV序列的检测
有人从AIDS或ARC病人的外周血单核细胞培养物，精液细胞和精液上清制备DNA。然后用PCR法和逆转录酶测定法分别检测HIV-1。PCR扩增产物与32P标记的探针退火之后用BstNI消化。再进行聚丙烯酰胺凝胶电泳和自显影。结果表明，在逆转录酶阴性的28个细胞系中有9个以及用逆转录酶法不能确定的9个细胞系中有2个为阳性。这说明过去许多细胞培养物认为是阴性者，实际上用更敏感的PCR测定时则为阳性。
从血清阳性的HIV感染者的外周血单核细胞中可检测出前病毒序列。通过共培养分离出病毒的血清阳性的同性恋男人血液制备的DNA，用PCR可100%检出病毒序列；用血清阴性共培养阴性同性恋者的标本，经PCR扩增检出病毒序列者为64%，血清阴性正常人标本PCR检测也为阴性，表明未出现假阳性结果。由于HIV-1基因组的广泛的异源性，为提高检测的阳性率可采用多种引物（如LTR，gag和env基因的引物）。利用PCR法从313份已证实为抗体阳性的标本中检测出310份HIV阳性（99%）。
(二)血清抗体阴性病人的HIV序列的检测
由于在感染HIV后到出现免疫反应之前有一段滞后期,这个血清学阴性的滞后期通常长达6周至6个月,而且无抗体产生期可能更长些.在此期间受感染者往往检测不到抗体,因此,血清阴性的人也可能已感染HIV.PCR法在高危人群中检测到HIV-1比由血清学转阳确诊的时间可以提高6个月.对少数初次共培养呈阴性的人,甚至可在血清转阳之前24～39个月就能确诊为HIV-1感染.对血清学试验结果不能确定者,也可通过PCR作进一步分析和确诊。
(三)新生儿HIV序列的检测
HIV感染的母亲其婴儿由于母体抗体的存在,用抗体检测法通常为阳性.但实际上只有20%～60%的婴儿受到HIV感染.因此,对这些婴儿进行HIV感染的早期诊断是十分重要的.现已证明30～50%的这些新生儿可在母亲的子宫里,在分娩和引产或通过产后哺乳时从其母体感染HIV.新生儿血清阳性者并不能说明是HIV感染.因为母体HIV抗体可持续大约15个月之久.在一般情况下,婴儿并不表现出HIV感染的任何症状.病毒细胞培养法对婴儿并不是一种可靠实用的方法;HIV特异IgM抗体的检测在母体抗体存在下也是不可能的;在过量血清抗体存在下检出血清中的HIV抗原也是十分困难的.另外,婴幼儿被HIV感染后病情发展较快.早期诊断,对及时采取治疗措施,延缓阻止病情发展极为重要.目前所使用的抗病毒药毒性大,因而不能用于HIV抗体阳性而未感染的婴幼儿.但当用PCR检测出HIV-DNA序列后,即可进行抗病毒治疗以及加强免疫机能和营养的治疗.在一项研究中,14名血清阳性母亲的新生儿用PCR检测其中6个为阳性;在出生后12～15个月内血清阴性的10个儿童中有5个为PCR阳性.从血清阳性母亲出生1个月的新生儿中,收集的外周血单核细胞经PCR检测,7个为阳性的婴儿,其中5个在检测后10个月得AIDS;而PCR阴性的9个婴儿,在16个月的追踪检查期间身体状况良好.这些研究表明,PCR技术对被HIV感染母亲的新生儿和血清阴性儿童进行早期的直接的HIV-1检测是十分重要的.
PCR技术检测HIV-DNA序列对AIDS和ARC的确诊起着重要作用.但也有人认为 对已知HIV抗体、抗原或培养阳性的病人不必再做PCR。最合适的PCR检测对象是那些疑有HIV感染但又缺乏确切的血清学依据的人群，如上述的HIV阳性母亲所生的婴儿，阳性患者的性伴侣，静脉吸毒者和可疑的血清反应者。PCR技术还可用来检测血液制品及疫苗中有无HIV。
7、T细胞亚群有什么意义？
方法：用流式细胞仪检测59例HIV／AIDS患者和51例健康献血员的T淋巴细胞，对其中40例患者的所有健康献血员进一步分析T淋巴细胞激活亚群（HLA－DR^+CD4^+、HLA-DR^+CD8^+和CD38^+CD8^+）；用bDNA病毒定量检测仪检测59例HIV／AIDS患者的血浆HIV病毒载量。结果：与正常人组相比，HIV组和AIDS组的T淋巴细胞各激活亚群的百分比均显著升高，所有激活亚群均与T4细胞计数成反比，而与病毒载量成正比。其中，CD38^+CD8^+亚群的百分比与T4细胞计数和病毒载量的相关性最为密切，相关系数分别为r=-0.603和r=0.523，（P＜0．01）。结论；HIV／AIDS患者的T淋巴细胞发生持续和异常的免疫激活，细胞激活程度与疾病进展高度相关，测定这些激活的T细胞亚群变化不仅有助于评价HIV／AIDS患者的免疫状况、判断病毒复制的活跃程度，而且对预示疾病进展和临床疗效评价方面均具有重要价值。 |
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发表于 2010-5-23 14:52
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