蛋白印迹法检测技术原理

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蛋白印迹法检测技术原理

    蛋白印迹法检测技术(immunoblottingtest，IBT)亦称酶联免疫电转移印斑技术(enzyme linked immunoelectrotransfer blotting，EITB)，因与Southern早先建立的检测核酸的印迹法——Southernblot(DNA印迹法)相类似，亦被称为Westernblot。

    Western印迹法是将蛋白质借高分辨率的PAGE电泳有效分离成许多蛋白区带，分离后的蛋白带经电转移至一种固相支持体如硝酸纤维素膜(NC)膜上，然后以抗体为探针，与附着于固相支持体的靶蛋白所呈现的抗原表位发生特异性反应，结合于固相支持体的抗体可用多种2级免疫学试剂(如125I标记的A蛋白或抗免疫球蛋白，HRP或ALP耦联的A蛋白或抗免疫球蛋白等)检测。较常用的两种电转移法为：

    ①半干印迹，即凝胶与固相支持物夹在缓冲液浸湿的滤纸之间，然后通电10—30min；

    ②湿印迹，即凝胶与支持体夹心物浸入转移缓冲液中进行电转移，至少需45min以上