来源: 日期：2011-4-2 (共有 0 条评论) 我要评论确认试剂的作用是对筛查试剂检测为有反应的样品进行确认，其主要目的是排除假阳性。按照目前的检测策略，确认为阳性的报告为HIV感染者；确认为阴性者则为非HIV感染者；对有条带出现但又不满足阳性判定标准的，则判为不确定者。对不确定者则应随访3个月后再检测其抗体，若符合阳性者则判为HIV感染者，若HIV抗体反应条带无进展者，再随访3个月，若符合阳性者则判为HIV感染者，若HIV抗体反应条带无进展者，则可报告为阴性。不确定病例的增加将明显增加工作量，而且也会增加被测者的心理负担。因此，一个好的确认试剂则应该尽可能判断为阴性或阳性，减少不确定者的检出。不同试剂之间、不同地区之间、不同人群之间以及不同检测策略之间不确定样品出现的比例是不同的。有研究显示，不同试剂所检测出的不确定样品的比例在7％～25．6％(Iqbal et aI．，2005)；在HIV低危人群、高危人群以及患有其他疾病者中不确定样品的检出比例分别为9．8％、33．2％和36．7％(Urnovitz et al_，1999)，HIV感染的危险性以及临床疾患，尤其自身免疫系统疾病影响其检测结果。在不确定样品中出现的条带并不是随机的，p24条带是经常出现的，有报道显示其在不确定样品中的比例可高达91．6％(Carneiro-proietti et a1．，1999)。相对而言，在不确定样品中出现抗gpl20／gpl60的比例相对较低。
典型的HIV-l WB结果应包括以下条带：p17、p24、p31、p39、gp41、p51、p55、p66和gpl20／gpl60。大多数国际组织的阳性判断标准应至少包括一条Env条带(gp41和gpl20／gpl60)和一条Gag条带(p17、p24和p55)，或一条Env条带和一条Pol条带(p31、p51和p66)。如果wB检测结果中有条带出现但不满足阳性判定标准，则将结果记为不确定，产生WB不确定(West|ern blot indeterminate，wBi)结果的原因是多方面的，主要包括样品的原因、试剂的原因和操作的原因等。
HIV感染的不同时期，感染者体内抗体类型及水平是不断变化的，这是产生wgi结果的一个主要原因。HIV感染的急性期，感染者体内抗体水平较低，针对HIV不同抗原的抗体没有完全出现，此情况下的WB检测易出现不确定结果，但随着病程的进展，wB检测也逐渐能将其判定为阳性(Celum et a1．，1991；Dock et a1．，1988)；AIDS病晚期，机体免疫系统被破坏，血清中抗体水平极低，wB检测易出现不确定结果(Biggar。et aI．，1985)；如果用HIV-l WB试剂检测HIV-2感染者样品，易出现不确定结果(Dock et a1．，1988)；Georgoulias等人的研究发现，低危人群献血员WB检测的不确定结果可能提示其为顿挫性感染(abortive infection)；感染基因缺失株HIV的个体，其wB检测易出现不确定结果(Rhodes et a1．，1999)；Kopko等人的研究发现，静默感染(immunosilent infection)个体的WB检测也易出现不确定结果，此情况下，往往只出现一条抗gpl60的条带，而不出现最常见的抗一核心蛋白条带(p24)；此外，不同型或亚型HIV的混合感染的个体，或HIV与SIV(猴免疫缺陷病毒)混合感染的个体，其wB检测结果也易出现不确定结果(Schaefer et a1．，2005)。
HIV与其他的逆转录病毒有一定的同源性，感染这类逆转录病毒可能会产生与HIV有交叉反应的抗体，因此有些wBi结果的产生可能与感染其他逆转录病毒有关，如人类T细胞白血病病毒(human T-cell leykemia virus，HTLV) (Dock et a1．，1988)、山羊关节炎-脑炎病毒(caprine arthritis-encephalitis virus，CAEV) (Tesoro-Cruz et a1．，2003)等。
除逆转录病毒感染外，患有某些特定疾病的个体HIV wB检测也容易出现不确定结果。研究表明，自身免疫病患者如系统性红斑狼疮、类风湿性关节炎、自身免疫性溶血性贫血、原发性血小板减少性紫癜、多发性硬化症、干燥综合征、重症肌无力，恶性肿瘤患者如慢性淋巴细胞白血病、乳腺癌、肺癌、结肠癌、霍奇金病、多发性骨髓瘤，以及泌尿系统疾病患者如急性肾小球肾炎、急性肾小管坏死、急性肾功能衰竭、慢性肾功能衰竭、肾病综合征，其HIV wB检测易出现不确定结果(Urnovitz et a1．，1999)。
除上述种种情况外，在HIV低流行区的健康献血员人群中也常常能检测到wBi结果，其中有些受试者有未经筛查的血液制品的使用史，有些为HIV阳性母亲的孩子，在各种医疗措施的干预下，这些孩子未感染HIV，其从母亲获得的HIV抗体随时问延长逐渐减弱，其HIV wB检测易出现不确定结果。除上述两种情况外，大多数低流行区健康人群的WBi结果无法用现有的知识来解释。HIV 0型env序列与人类14种不同的染色体有同源性(Urnovitz et a1．，1999)；健康人的血清中常常含有针对哺乳动物C型逆转录病毒种间抗原的抗体(Urnovitz and Murphy，1996)。这些内源性的逆转录因子可能是产生wBi结果的部分原因，但还需进一步的研究证实。
(二)试剂的原因
不同批次试剂之间的差异可能是产生WBi结果的一个原因，特别是不同批次试剂检测结果的重复性较差时。当检测程序和检测对象无明显变化，而同种试剂检测的wBi结果发生率突然发生变化时，该试剂可能存在质量问题。导致试剂出现质量问题的原因是多方面的，如材料选择方面的原因、试剂盒优化方面的原因及试剂盒生产方面的原因。如抗原制备时，来源于病毒培养细胞的非病毒蛋白去除不够彻底，掺入的非病毒蛋白可能与待测样品中的抗体发生交叉反应，从而产生wBi结果。此外，判断标准制定的不合理也易产生wBi结果，如20世纪80年代，一份ELISA阳性样品在wB检测中虽只有p52一条带也被定为了阳性，但在后续的随访检测中证明该样品为假阳性，而依据现在的判断标准，此结果应定为不确定(Roy et a1．，1987)。通过对判定标准进行合理修订能有效降低wBi结果的发生率。
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发表于 2012-4-24 12:16
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发表于 2012-4-24 12:52
