什么是罗氏发光法?

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什么是罗氏发光法?

仁心仁术

本帖最后由 仁心仁术 于 2010-3-18 21:42 编辑

罗氏发光法是罗氏公司发明的电化学发光免疫测定方法，是继放免、酶免、荧光免疫、化学发光免疫测定以后的新一代标记免疫测定技术，是电化学发光（ECL）和免疫测定相结合的产物。   

      罗氏始创于1896年，总部位于瑞士巴塞尔，在制药和诊断领域是世界领先的以研发为基础，以创新驱动的健康事业公司之一。作为全球最大的生物技术公司，——药品和诊断，提供从早期发现、预防、诊断到治疗的创新产品与服务，从而提高了人类的健康水准和生活质量。罗氏是体外诊断领域、抗肿瘤药品和移植药品的全球领先者；是病毒学领域以及其他关键疾病领域如自身免疫性疾病、炎症、代谢和中枢神经系统疾病的市场领导者。经过百余年发展，罗氏集团的业务已遍布世界150多个国家，共拥有约79,000名员工，并与包括罗氏控股的美国基因泰克、日本中外制药在内的多个合作伙伴建立了研究与开发的业务联盟。罗氏注重永续性发展，保持良好营运表现，2007年，罗氏药品部和诊断部分别实现了总额达368亿瑞士法郎和93亿法郎的销售业绩，研发投入超过80亿瑞士法郎。

　　罗氏诊断拥有十分宽广的业务范围，为全世界的研究人员、医师、患者、医院和实验室提供多样化的创新性检测产品和服务。在全球有超过23,000名员工致力于科研、产品研发、产品市场运作、服务以及一体化解决方案，并在40多个国家设有分支机构。我们将致力于提供卓越的服务以提高客户的工作效率，并为客户、员工、股东和社会创造更高的价值。

   电化学发光免疫测定（Electrochemiluminescence immunoassay, ECLIA）是继放免、酶免、荧光免疫、化学发光免疫测定以后的新一代标记免疫测定技术，是电化学发光（ECL）和免疫测定相结合的产物。

以TSH为例：
第一步：
结合了活化的三联吡啶钌衍生物即[Ru(bpy)3]2+ + N羟基琥珀酰胺酯（NHS）的TSH抗体和结合了生物素的TSH抗体与待测血清同时加入一个反应杯中，孵育9分钟。

第二步：
将被链霉亲和素包被的磁珠加入反应杯中，再次孵育9分钟，使生物素通过与亲和素的结合将磁珠、TSH抗体连接为一体，形成双抗体夹心法。

　　下一步，蠕动泵将形成的[Ru(bpy)3]2+－抗体－抗原－抗体－磁珠复合体吸入流动测量室，此时，磁珠被工作电极下面的磁铁吸附于电极表面。同时，游离的TSH抗体（与生物素结合的和与[Ru(bpy)3]2+结合的抗体）也被吸出测量室。紧接着，蠕动泵加入含三丙胺（TPA）的缓冲液，同时电极加电压，启动ECL反应过程。发光剂[Ru(bpy)3]2+和电子供体TPA在阳极表面可同时各失去一个电子而发生氧化反应，使二价的[Ru(bpy)3]2+被氧化成三价，后者是一种强氧化剂；另一方面，TPA 被氧化成阳离子自由基TPA+●，后者很不稳定，可自发失去一个质子（H+），形成自由基TPA●，这是一种很强的还原剂，可将一个电子给三价的[Ru(bpy)3]3+，使其形成激发态的[Ru(bpy)3]2+，而TPA自身被氧化成二丙胺和丙醛。激发态的[Ru(bpy)3]2+通过荧光机制衰减，发射出一个波长620nm的光子，重新生成基态的[Ru(bpy)3]2+。该过程在电极表面周而复始地进行，产生许多光子，光电倍增管检测光强度，光强度与[Ru(bpy)3]2+的浓度呈线性关系，故可测出待测抗原的含量。

　　 最后，终止电压，移开磁珠，加入清洗液冲洗流动测量室，准备下一个样品测定。