zjksyou1 发表于 2010-3-18 21:27

什么是罗氏发光法?

什么是罗氏发光法?

仁心仁术 发表于 2010-3-18 21:39

本帖最后由 仁心仁术 于 2010-3-18 21:42 编辑

罗氏发光法是罗氏公司发明的电化学发光免疫测定方法,是继放免、酶免、荧光免疫、化学发光免疫测定以后的新一代标记免疫测定技术,是电化学发光(ECL)和免疫测定相结合的产物。   

      罗氏始创于1896年,总部位于瑞士巴塞尔,在制药和诊断领域是世界领先的以研发为基础,以创新驱动的健康事业公司之一。作为全球最大的生物技术公司,——药品和诊断,提供从早期发现、预防、诊断到治疗的创新产品与服务,从而提高了人类的健康水准和生活质量。罗氏是体外诊断领域、抗肿瘤药品和移植药品的全球领先者;是病毒学领域以及其他关键疾病领域如自身免疫性疾病、炎症、代谢和中枢神经系统疾病的市场领导者。经过百余年发展,罗氏集团的业务已遍布世界150多个国家,共拥有约79,000名员工,并与包括罗氏控股的美国基因泰克、日本中外制药在内的多个合作伙伴建立了研究与开发的业务联盟。罗氏注重永续性发展,保持良好营运表现,2007年,罗氏药品部和诊断部分别实现了总额达368亿瑞士法郎和93亿法郎的销售业绩,研发投入超过80亿瑞士法郎。

  罗氏诊断拥有十分宽广的业务范围,为全世界的研究人员、医师、患者、医院和实验室提供多样化的创新性检测产品和服务。在全球有超过23,000名员工致力于科研、产品研发、产品市场运作、服务以及一体化解决方案,并在40多个国家设有分支机构。我们将致力于提供卓越的服务以提高客户的工作效率,并为客户、员工、股东和社会创造更高的价值。

   电化学发光免疫测定(Electrochemiluminescence immunoassay, ECLIA)是继放免、酶免、荧光免疫、化学发光免疫测定以后的新一代标记免疫测定技术,是电化学发光(ECL)和免疫测定相结合的产物。

以TSH为例:
第一步:
结合了活化的三联吡啶钌衍生物即2+ + N羟基琥珀酰胺酯(NHS)的TSH抗体和结合了生物素的TSH抗体与待测血清同时加入一个反应杯中,孵育9分钟。

第二步:
将被链霉亲和素包被的磁珠加入反应杯中,再次孵育9分钟,使生物素通过与亲和素的结合将磁珠、TSH抗体连接为一体,形成双抗体夹心法。

  下一步,蠕动泵将形成的2+-抗体-抗原-抗体-磁珠复合体吸入流动测量室,此时,磁珠被工作电极下面的磁铁吸附于电极表面。同时,游离的TSH抗体(与生物素结合的和与2+结合的抗体)也被吸出测量室。紧接着,蠕动泵加入含三丙胺(TPA)的缓冲液,同时电极加电压,启动ECL反应过程。发光剂2+和电子供体TPA在阳极表面可同时各失去一个电子而发生氧化反应,使二价的2+被氧化成三价,后者是一种强氧化剂;另一方面,TPA 被氧化成阳离子自由基TPA+●,后者很不稳定,可自发失去一个质子(H+),形成自由基TPA●,这是一种很强的还原剂,可将一个电子给三价的3+,使其形成激发态的2+,而TPA自身被氧化成二丙胺和丙醛。激发态的2+通过荧光机制衰减,发射出一个波长620nm的光子,重新生成基态的2+。该过程在电极表面周而复始地进行,产生许多光子,光电倍增管检测光强度,光强度与2+的浓度呈线性关系,故可测出待测抗原的含量。

   最后,终止电压,移开磁珠,加入清洗液冲洗流动测量室,准备下一个样品测定。

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